人臍靜脈內皮原代細胞-GFP（人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記（免疫熒光)）

貨號：IML-031

規(guī)格：1x10⁶cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)基：人臍靜脈內皮原代細胞專用培養(yǎng)基+1.0ug/ml puro

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

傳代比例：首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代是1個T25瓶傳2個T25瓶或2個6cm皿

人臍靜脈內皮原代細胞-GFP

價格：￥8000

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配套相關培養(yǎng)產品

背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務

一、細胞基本屬性
細胞名稱	人臍靜脈內皮原代細胞-GFP（人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記）（免疫熒光)
細胞別稱	人臍靜脈內皮原代細胞+GFP；人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記
種屬來源	人
組織來源	臍帶組織
生長特性	貼壁生長
細胞形態(tài)	上皮細胞樣
背景介紹	人臍靜脈內皮原代細胞細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因，并穩(wěn)定表達GFP蛋白。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產物即代謝廢物和營養(yǎng)物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質從胎盤運送給胎兒。
puro藥篩濃度	人臍靜脈內皮原代細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml濃度puro維持
細胞規(guī)格	1x10⁶cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測	無
培養(yǎng)基	人臍靜脈內皮原代細胞專用培養(yǎng)基+1.0ug/ml puro
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
細胞貨期	2周左右
運輸方式	復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）順豐快遞
供應限制	僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
特別說明	以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主
二、細胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復蘇細胞/T25瓶運輸
收貨處理	1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細胞/1ml凍存管運輸
收貨處理	1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復蘇操作	1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。
注意事項	1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。
三、細胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

科研細胞購買常見問題

問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？

答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？

答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。

問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。

科研細胞售后服務

細胞重發(fā)標準

1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；

3.收到細胞3天內，發(fā)現(xiàn)污染問題，經核實后，重發(fā)；

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經核實后，重發(fā)；

5.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發(fā)；

6.視具體情況而定。

細胞不予重發(fā)標準

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；

7.視具體情況而定。

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