本視頻為廈門逸漠生物科技有限公司出品關(guān)于貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)步驟操作指南，我們對每一步操作都做了演示，以便實驗者更好地理解貼壁細(xì)胞傳代實驗過程。

貼壁細(xì)胞傳代實驗準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺面

貼壁細(xì)胞傳代所需試劑物品

細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶，PBS，培養(yǎng)皿等

貼壁細(xì)胞傳代步驟

從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到80%以上時，即可進(jìn)行傳代；

第一步：將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS；

第二步：輕洗細(xì)胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS棄去；

第三步：加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落；

第四步：加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞吹散，移入15ml離心機(jī)管中，1000rpm，離心5min；

第五步：取兩個新的培養(yǎng)皿，各加入8-10m1完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱，日期和所用培養(yǎng)基名稱；

第六步：離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺中，吸去上清；

第七步：取2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，平均分配到2個皿中，“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻；

第八步：把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察貼壁情況；

注意事項

1.培養(yǎng)過程中需維持細(xì)胞處于對數(shù)生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請參照說明書建議；

2.消化時間不宜過長，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化，每次時間不超過5min。

3.培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細(xì)胞建議2-3天換液一次。