細(xì)胞換液是指去除舊的培養(yǎng)基，換成新的完全培養(yǎng)基以繼續(xù)提供細(xì)胞充足的營(yíng)養(yǎng)支持。當(dāng)舊培養(yǎng)基 ph 值改變(含酚紅的培養(yǎng)基通常是變酸發(fā)黃)時(shí)，需要及時(shí)進(jìn)行換液。在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中，換液是一項(xiàng)非常常規(guī)操作，它主要是為了清除細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的各種代謝廢物，補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞換液主要有全換液和半換液兩種方式，那么，不同方式的換液方法如何更換細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的溶液呢?

換液前工作準(zhǔn)備

環(huán)境準(zhǔn)備：相對(duì)密封、防塵、防菌的無(wú)菌室

操作者準(zhǔn)備：雙手清潔呈可操作狀態(tài)

物品準(zhǔn)備：超凈工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。

工作準(zhǔn)備：預(yù)熱完全培養(yǎng)基，酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜/超凈工作臺(tái)。

細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出的細(xì)胞，酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶/皿外表面，移入生物安全柜/超凈工作臺(tái)?？梢陨缘却?，待生物安全柜中的循環(huán)風(fēng)將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后，擰開(kāi)培養(yǎng)基瓶蓋虛掩，擰開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩，培養(yǎng)皿蓋不用擰。

細(xì)胞半換液和全換液操作步驟

第一種方式：細(xì)胞全換液

如果是貼壁細(xì)胞，可以用全量換液法，直接吸去全部舊培養(yǎng)基，補(bǔ)充足量新鮮完全培養(yǎng)基。

細(xì)胞全換液具體步驟

1.將器材放入超凈臺(tái)，打開(kāi)紫外照射滅菌，若是培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)溫度比較敏感，可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃，再轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)紫外滅菌。另外，細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時(shí)左右。

2.從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒，轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)，打開(kāi)蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基，注意一定不要從細(xì)胞貼壁面加入培養(yǎng)基，應(yīng)從側(cè)壁加，動(dòng)作輕柔，以免沖落細(xì)胞。

3.加好培養(yǎng)基后，蓋上蓋子，在瓶子上做標(biāo)記，注明換液時(shí)間，細(xì)胞種類(lèi)，操作人員等信息。

4.放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴瓶子表面，然后應(yīng)記得整理操作臺(tái)，用酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面，清理廢液和垃圾。

第二種方式：細(xì)胞半換液

“細(xì)胞半換液”又稱(chēng)“細(xì)胞半量換液”，即棄掉一半舊的培養(yǎng)基，再加一半新的進(jìn)去。選它的原因其實(shí)與前面不加PBS的理由有點(diǎn)相近。

半換液原因

1.給細(xì)胞提供適應(yīng)的緩沖環(huán)境;

2.細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中可能會(huì)分泌某些生長(zhǎng)因子，促進(jìn)生長(zhǎng);

3.節(jié)省材料

4.方便操作：比如96孔板，換液很麻煩。所以常采用排槍進(jìn)行半換液;

5.對(duì)于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，有時(shí)也會(huì)選用半換液減低細(xì)胞密度;

細(xì)胞半換液操作步驟

如果是懸浮細(xì)胞，可以用半量換液法。

1.即吸去一半舊培養(yǎng)基

2.補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基(會(huì)損失一半細(xì)胞)。

懸浮細(xì)胞如果不想損失細(xì)胞，那就需要將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管中，離心去除舊培養(yǎng)基，再用新培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀。

細(xì)胞換液常見(jiàn)問(wèn)題

1.細(xì)胞換液是否需要用PBS清洗?

我們知道，在“貼壁細(xì)胞傳代”中，培養(yǎng)基中的血清會(huì)抑制胰酶的活性，影響消化的效果，所以必須要PBS 的清洗。

但對(duì)于細(xì)胞換液，尚未查到有資料明確說(shuō)明是否需要PBS清洗。

這里應(yīng)該根據(jù)細(xì)胞的具體情況考慮

a.若細(xì)胞比較“嬌氣”或生長(zhǎng)狀態(tài)不是特別好時(shí)，建議還是不要用PBS清洗。一方面，細(xì)胞貼壁的狀態(tài)可能不是很牢固，PBS的沖洗會(huì)破壞細(xì)胞的貼壁狀態(tài);另一方面，PBS可能會(huì)洗掉細(xì)胞分泌的一些生長(zhǎng)因子，這同樣不利于細(xì)胞狀態(tài)的調(diào)整。如果一定要洗，可以緩慢清洗，減少對(duì)細(xì)胞的傷害

b.當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不錯(cuò)，或者顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞液中不是很干凈時(shí)，可以選擇用PBS清洗。一方面可以去除積累的代謝物;另一方面，也可將一些生長(zhǎng)狀態(tài)不好或衰老的細(xì)胞洗脫下來(lái)，保持細(xì)胞活力。

細(xì)胞換液注意事項(xiàng)

1.在進(jìn)行換液操作時(shí)，全程注意無(wú)菌，操作人員要穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩，手接觸到細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口時(shí)一定要小心，避免造成污染。

2.加培養(yǎng)液時(shí)，不可直接加到細(xì)胞貼壁的面上。

3.換液前記得觀(guān)察細(xì)胞的狀態(tài)及拍照記錄

不光細(xì)胞維持培養(yǎng)時(shí)需要進(jìn)行細(xì)胞換液，一些實(shí)驗(yàn)操作也需要進(jìn)行細(xì)胞換液。當(dāng)換液操作是實(shí)驗(yàn)需要時(shí)，可能在添加新的培養(yǎng)基前需要 PBS 清洗細(xì)胞以去除舊培養(yǎng)基的影響， 新添加的培養(yǎng)基也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行特殊配制，不一定是完全培養(yǎng)基。