HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞（STR鑒定報告）

貨號：IM-H102 來源：ATCC

規(guī)格：1×10⁶cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)基：90%5A+10% FBS+PS

傳代方法：1:2至1:3，每周 3 次

HT-29細(xì)胞貼壁較慢，形態(tài)展開更慢，所以一定要有耐心

人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29細(xì)胞說明書

價格：￥1200

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背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

背景簡介

HT-29細(xì)胞系由J.Fogh在1964年用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離。近來，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清McCoy’s 5A培液培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中致瘤，也能在類固醇處理的地鼠中致瘤。

HT-29細(xì)胞合成IgA、CEA、TGFβ結(jié)合蛋白和黏液素等;表達(dá)尿激酶受體，但沒有檢測到血漿酶原活性;不表達(dá)CD4，但細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖神經(jīng)酰胺(HIV的可能替代受體)。HT-29細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征包括微絨毛、微絲、帶有深色顆粒的大空泡線粒體、帶有游離核糖體的光滑粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、脂滴、少量初級溶酶體和許多次級溶酶體。細(xì)胞表達(dá)尿激酶受體，但不具有可檢測的纖溶酶原激活活性。HT-29細(xì)胞CD4呈陰性，但細(xì)胞表面存在半乳糖神經(jīng)酰胺(一種可能的HIV替代受體)的表達(dá)。HT-29細(xì)胞c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos癌基因表達(dá)陽性，但未檢測到N-myc癌基因表達(dá)，p53抗原過度產(chǎn)生，p53基因的密碼子273存在G->a突變，導(dǎo)致Arg->His取代。HT-29細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、高通量篩選、癌癥研究和毒理學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞（STR鑒定報告）
細(xì)胞別稱	HT 29; HT29；HT-29；人結(jié)腸癌細(xì)胞
種屬來源	人
年齡性別	女；44歲
組織來源	結(jié)腸
生長特性	貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)	10代以內(nèi)
特別注意	ht29細(xì)胞貼壁及展開較慢，24h后有部分細(xì)胞依然有一部分細(xì)胞未展開貼壁屬于正?，F(xiàn)象，最好傳代后24-48h內(nèi)盡量不要移動
STR位點	Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：11，12；D16S539：11，12；D18S51：13；D19S433：14；D21S11：29，30；D2S1338：19，23；D3S1358：15，16.3；D5S818：11，12；D7S820：10；D8S1179：10，16；FGA：20，22；TH01：6，9；TPOX：8，9；vWA：17，19；
同工酶	AK-1, 1;ES-D, 1;G6PD, B;GLO-I, 1-2;Me-2, 1;PGM1, 1-2;PGM3, 1-2
STR鑒定位點圖
HT29 細(xì)胞系成瘤性	HT29細(xì)胞系在 M-NSG 小鼠皮下接種 HT29 細(xì)胞，成瘤曲線如下圖所示經(jīng)皮下成瘤檢測實驗表明該細(xì)胞系在皮下接種后，能正常成瘤。
生物安全等級	1
使用權(quán)限	A類
染色體	64~69
倍增時間	~36-60 hours
致瘤性	Yes, in nude mice; forms well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade I); tumors also form in steroid treated hamsters.
受體表達(dá)情況	human adrenergic alpha2A, urokinase receptor (u-PAR), vitamin D (moderate expression), urokinase receptor (u-PAR); vitamin D (moderate expression), human adrenergic alpha2A
基因表達(dá)情況	secretory component of IgA; carcinoembryonic antigen (CEA); transforming growth factor beta binding protein; mucin, myc+; ras+; myb+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, Blood Type A; Rh+; HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, HT-29 cells are negative for CD4, but there is cell surface expression of galactose ceramide (a possible alternative receptor for HIV).
細(xì)胞規(guī)格	1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測	無
保藏機構(gòu)	ATCC; HTB-38 BCRJ; 0111 CCLV; CCLV-RIE 0960 DSMZ; ACC-299 ECACC; 91072201；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
培養(yǎng)基	90%5A+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
細(xì)胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）順豐快遞
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運輸
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞/1ml凍存管運輸
收貨處理	1.干冰運輸?shù)募?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項	1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。
HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問題
1.HT-29細(xì)胞特點 a.隨著貼壁時間延長，細(xì)胞形態(tài)有很大變化，從剛開始的亮亮圓圓的單顆細(xì)胞，到呈片生長的上皮樣。 b.ht29細(xì)胞貼壁48h后呈島狀聚集生長，當(dāng)ht29細(xì)胞密度較大時，不易消化并易成團。所以控制消化時間尤為重要，消化時間過短，細(xì)胞不易從瓶壁脫落，吹打過度，導(dǎo)致細(xì)胞碎裂，碎片過多；消化過度，導(dǎo)致細(xì)胞傳代后漂浮增多。 2.如何養(yǎng)好HT29細(xì)胞 a..降低傳代密度，當(dāng)ht29細(xì)胞融合度70%-75%左右就可進行傳代。 b.傳代后24-48小時內(nèi)不要移動。 c.消化時，不要反復(fù)晃動培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿，可培養(yǎng)箱內(nèi)靜置消化，否則細(xì)胞會呈屑樣脫落，不利于消化成單顆細(xì)胞。 d.ht29細(xì)胞生長時，會有少量漂浮細(xì)胞碎片，背景可見少量黑點，是正常現(xiàn)象，不要過度清洗，隨著換液和傳代可暫時改善，但繼續(xù)培養(yǎng)無法避免。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細(xì)胞按計數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進行細(xì)胞計數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

參考文獻

ATF3 inhibits the growth and stem cells-like features of SW620 colorectal cancer cells in vitro. Journal of Men's Health. 2021. 17(4);287-294.

作者：Chuanqian Huang, Changdan Chen, Fangjing Zheng, Xiaoxiao Ni, Jianfang Lin, Wenjuan Wu, Xiaolan Lai.

細(xì)胞：The human colon cell line NCM460 and the CRC cell lines SW620, SW480, HT29, HCT8, and HCT116.

2022年影響因子/JCR分區(qū)：0.789/Q4

Long Intergenic Noncoding RNA 00641 Promotes Growth and Invasion of Colorectal Cancer through Regulating miR-450b-5p/GOLPH3 Axis. J Oncol. 2022 Jun 15;2022:8259135. doi: 10.1155/2022/8259135. PMID: 35756081; PMCID: PMC9217543.

作者：Hong Z, Pan J, Chen M, Deng X, Chen Z, Wang C, Qiu C.

細(xì)胞：Primary CRC cell lines (SW480, HT-29, and HCT-116), metastatic CRC cell line SW620, NCM460 normal colon mucosal epithelial cell line, and 293T cell line

2022年影響因子/JCR分區(qū)：4.501/Q2

科研細(xì)胞購買常見問題

問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細(xì)胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細(xì)胞運輸與常溫細(xì)胞運輸相比有什么區(qū)別？

答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。

問：運輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個細(xì)胞系只有一個RRID。

科研細(xì)胞售后服務(wù)

細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；

5.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；

6.視具體情況而定。

細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；

7.視具體情況而定。

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青霉素-鏈霉素-兩性霉素B溶液（三抗）100×

0.25%胰蛋白酶溶液（溶于PBS）（胰酶）

背景簡介

HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

1.HT-29細(xì)胞特點

2.如何養(yǎng)好HT29細(xì)胞

參考文獻

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第一節(jié):復(fù)蘇細(xì)胞收貨處理教程

第二節(jié):凍存細(xì)胞收貨處理教程

第三節(jié):細(xì)胞復(fù)蘇教程

第四節(jié):貼壁細(xì)胞傳代步驟

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