常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IM-H494 來源：ATCC
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長
培養(yǎng)基：NK-92MI完全培養(yǎng)基
傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次
NK-92MI細(xì)胞團(tuán)塊需要吹散，但不用刻意吹散成單顆
NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞說明書
價(jià)格：￥3000
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥1980
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
NK-92細(xì)胞是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92MI細(xì)胞是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92細(xì)胞的IL-2非依賴的NK細(xì)胞株。親本細(xì)胞NK-92通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化?？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。其親本IL-2依賴的細(xì)胞株NK-92細(xì)胞及另一株同樣來源于NK-92細(xì)胞株的IL-2非依賴的細(xì)胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細(xì)胞和NK-92CI細(xì)胞這兩個(gè)變種都包含、表達(dá)并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細(xì)胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細(xì)胞不合成表達(dá)。1998年9月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體，其后代通過BM細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測試進(jìn)行支原體檢測，結(jié)果都呈陰性。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | NK-92MI（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞）(STR鑒定報(bào)告) | |||
| 細(xì)胞別稱 | NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 50歲；男性 | |||
| 組織來源 | 外周血 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X,Y;CSF1PO：11,12;D3S1358：15;D5S818：12,13;D7S820：10,11;D8S1179：12,15;D13S317：9,12;D16S539：11,12;D18S51：12,17;D21S11：31.2,32;FGA：20,22;PentaD：10,12;PentaE：12;TH01：6,9.3;TPOX：8;vWA;16,18 | |||
| STR鑒定位點(diǎn)圖 |  | |||
| 重要提醒 | 1.該細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時(shí)間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時(shí)密度盡量大些。 2.培養(yǎng)過程中有少量細(xì)胞分泌物屬于正?，F(xiàn)象，不影響細(xì)胞生長。 3.傳細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久，最好小于1 h 4.重懸細(xì)胞要輕柔，不要太劇烈 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體污染 | 無 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2408 | |||
| 培養(yǎng)基 | NK-92MI完全培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 發(fā)貨方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
NK-92MI人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞培養(yǎng)常見問題 | ||||
1.NK-92MI人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)?
NK-92MI細(xì)胞都為懸浮生長，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì)胞間隙會有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片;NK-92MI細(xì)胞雖然對IL-2不敏感，正常培養(yǎng)不需要補(bǔ)加IL-2，但如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不太好，散在細(xì)胞變多，細(xì)胞不生長等情況，也可以以200U/ml的濃度補(bǔ)加IL-2，培養(yǎng)2-3天后狀態(tài)會有改善。 2.NK-92MI人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞怎么換液?NK-92MI細(xì)胞與NK-92細(xì)胞都對離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心; 換液方法： 補(bǔ)液法：每2~3天補(bǔ)加適量(根據(jù)培養(yǎng)容器和原來細(xì)胞懸液體積來定，T25瓶一次補(bǔ)液1~2毫升即可)新鮮培養(yǎng)基(NK-92需要同時(shí)補(bǔ)加200 U/ml IL-2，而NK-92MI則不需要)，補(bǔ)加2-3次之后，離心全部換液。 半換液法：以T25瓶子(瓶中裝有5ml培養(yǎng)基)為例，豎起瓶子靜置一段時(shí)間(豎瓶前輕拍培瓶，讓輕貼底部的細(xì)胞團(tuán)浮起來)，待細(xì)胞沉底(肉眼觀察細(xì)胞沉底情況)，小心吸出2.5ml上清轉(zhuǎn)移到離心管，離心1000rpm 3~5min，離心后的細(xì)沉淀用2.5ml新鮮培養(yǎng)重懸后放回原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。 細(xì)胞生長時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn)白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代； 3.NK-92MI細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)?NK-92MI細(xì)胞每3天補(bǔ)液一次，補(bǔ)充1-2ml新鮮培養(yǎng)基即可，補(bǔ)加1-2次之后半量換液，不要頻繁離心； 觀察到培養(yǎng)基明顯變黃，細(xì)胞團(tuán)塊明顯變大后可以分瓶，一次傳代最多分一瓶同等大小培養(yǎng)瓶。 細(xì)胞生長需要穩(wěn)定的環(huán)境，可每天觀察1次，不要頻繁拿出培養(yǎng)箱觀察; 4.NK-92MI人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞團(tuán)塊需要吹散嗎?NK-92MI細(xì)胞團(tuán)塊需要吹散，但不用刻意吹散成單顆； 正常傳代或者離心換液后吹打，控制吹打次數(shù)以及力度，即使細(xì)胞都分散成單個(gè)，也會在1~2天內(nèi)聚集起來； 細(xì)胞團(tuán)太大時(shí)，需要分散； 細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。 | ||||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 3.靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)（使細(xì)胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時(shí)請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時(shí)按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。
細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
5.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細(xì)胞聚團(tuán)的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成;首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進(jìn)行傳代,此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細(xì)胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細(xì)胞空泡情況有1.細(xì)胞老化2.培養(yǎng)液錯(cuò)誤配制;3.細(xì)胞消化時(shí)操作不當(dāng);4.污染等等,如細(xì)胞老化,解決方法,原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過高
細(xì)胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細(xì)胞全換液;如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補(bǔ)充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細(xì)胞半換液;"細(xì)胞半換液"又稱"細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進(jìn)去,選它的原因其實(shí)與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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