背景簡(jiǎn)介

B淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞存在于胎肝的造血細(xì)胞島中，此后B淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生和分化場(chǎng)所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細(xì)胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。B細(xì)胞在抗原刺激下可分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執(zhí)行機(jī)體的體液免疫。
B細(xì)胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標(biāo)志的表達(dá)。B細(xì)胞在發(fā)育分化過(guò)程中，同樣也經(jīng)歷選擇作用，以除去非功能性基因重排B細(xì)胞和自身反應(yīng)性B細(xì)胞，形成周?chē)墒斓腂細(xì)胞庫(kù)。B細(xì)胞表面有多種膜表面分子，識(shí)別抗原、與免疫細(xì)胞和免疫分子相互作用，也是分離和鑒別B細(xì)胞的重要依據(jù)。B細(xì)胞表面分子主要有白細(xì)胞分化抗原、MHC以及多種膜表面受體。

細(xì)胞產(chǎn)品信息

原代大鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

原代大鼠B淋巴細(xì)胞傳代操作方法

到貨方式：復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸

收貨處理

1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系;如果沒(méi)有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。

2.靜置后觀(guān)察原代大鼠B淋巴細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。

3.靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀(guān)察密度

c.如密度90%，建議傳代

4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤(rùn)洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞細(xì)胞傳代操作步驟

傳代密度：原代大鼠B淋巴細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

3申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶(hù)在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類(lèi)細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟

到貨方式：凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸

收貨處理

1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞細(xì)胞復(fù)蘇方法

培養(yǎng)皿/瓶：一管原代大鼠B淋巴細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。

2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

3.然后將所有原代大鼠B淋巴細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜)。

4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞凍存操作方法

凍存液配方：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞?/p>

如果沒(méi)要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞凍存操作步驟

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集原代大鼠B淋巴細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)原代大鼠B淋巴細(xì)胞株數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10^6~1x10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代大鼠B淋巴細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案