HL-60細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)體系介紹
HL-60細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)體系介紹:HL-60人急性早幼粒白血病細(xì)胞培養(yǎng)基: 80%IMDM+20%FBS +PS,生長(zhǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃,HL-60細(xì)胞復(fù)蘇步驟1.將含有1 mLHL-60細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻;2.在1000 rpm條件下···
貨號(hào)：IM-H195 來(lái)源：ATCC
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長(zhǎng)
培養(yǎng)基：80%IMDM+20%FBS+PS
傳代方法：1:2至1:4，每周 3次
人急性早幼粒白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
價(jià)格：￥1500
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥1500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
HL-60是一株早幼粒細(xì)胞。外周血白細(xì)胞來(lái)自一位患有急性粒-單核細(xì)胞白血病的36歲白人女性。 HL-60 自發(fā)分化，丁酸鹽、次黃嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1% to 1.5%)、放線菌素D和視黃酸可以促進(jìn)分化。細(xì)胞表現(xiàn)出吞噬活性，并對(duì)趨化刺激有響應(yīng)。致癌基因myc表達(dá)陽(yáng)性。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱(chēng) | HL-60人急性早幼粒白血病細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告） | |||
| 細(xì)胞別稱(chēng) | HL 60; HL60；人急性早幼粒白血病細(xì)胞 | |||
| 種屬來(lái)源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 36歲，女 | |||
| 組織來(lái)源 | 外周血，早幼粒細(xì)胞 | |||
| 生長(zhǎng)特性 | 懸浮生長(zhǎng) | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以?xún)?nèi) | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X；CSF1PO：13，14；D13S317：8，11；D16S539：11；D18S51：14，15；D19S433：14；D21S11：29，30；D2S1338：17；D3S1358：16；D5S818：12；D7S820：11，12；D8S1179：13；FGA：22，24；TH01：7，8；TPOX：8，11；vWA：16； | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 生物安全等級(jí) | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測(cè) | 無(wú) | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CCL-240 BCRC; 60027 BCRJ; 0104 DSMZ; ACC-3 ECACC; 98070106；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心 | |||
| 培養(yǎng)基 | 80%IMDM+20%FBS +PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 倍增時(shí)間 | ~28-40 hours | |||
| 致瘤性 | Yes, in nude mice (subcutaneous myeloid tumors). Yes, in semi-solid media. | |||
| 受體表達(dá)情況 | complement, expressed; Fc, expressed | |||
| 基因表達(dá)情況 | tumor necrosis factor (TNF), also known as tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha, TNF alpha), after stimulation with phorbol myristic acid, myc+ | |||
| 染色體 | 34~43 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主 | |||
HL-60人急性早幼粒白血病細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題 | ||||
1.HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)慢、狀態(tài)差怎么辦？當(dāng)細(xì)胞傳代后生長(zhǎng)速度慢且狀態(tài)不佳時(shí)，可豎著培養(yǎng)直到培養(yǎng)基變黃，待細(xì)胞密度起來(lái)后，狀態(tài)會(huì)有所好轉(zhuǎn)。 同時(shí)，若HL-60細(xì)胞狀態(tài)很差，可采用半換液的方式： 以T25瓶子為例，瓶子里有5mL培養(yǎng)基，豎起瓶子靜置一段時(shí)間(豎瓶前拍拍瓶子，讓輕貼底部的細(xì)胞團(tuán)浮起來(lái))，待細(xì)胞沉底(肉眼觀察細(xì)胞沉底情況)，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管，離心1000rpm 3~5min，用2.5mL新鮮培養(yǎng)基重懸后再放回原瓶。 2.HL-60人急性早幼粒白血病細(xì)胞培養(yǎng)技巧？
HL-60細(xì)胞在高密度下?tīng)顟B(tài)比較好，細(xì)胞狀態(tài)好時(shí)會(huì)吸收一些細(xì)胞碎片； 低密度時(shí)細(xì)胞狀態(tài)很差，傳代比例要控制，當(dāng)培養(yǎng)密度達(dá)到1x106/mL左右時(shí)可傳代，細(xì)胞狀態(tài)不好時(shí)后面?zhèn)鞔梢圆挥秒x心； DMSO會(huì)對(duì)HL-60刺激分化，建議復(fù)蘇馬上離心去除DMSO； 懸浮細(xì)胞對(duì)血清要求高，選用優(yōu)質(zhì)血清培養(yǎng)； 培養(yǎng)過(guò)程中盡量不動(dòng)或少動(dòng)培養(yǎng)瓶。 | ||||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒(méi)有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 3.靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)（使細(xì)胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤(rùn)洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶(hù)先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶(hù)在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類(lèi)細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒(méi)要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶(hù)復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以?xún)龃婕?xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。
問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。
細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
5.細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.客戶(hù)操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2.客戶(hù)嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)；
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見(jiàn)細(xì)胞污染類(lèi)型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲(chóng)污染,黑膠蟲(chóng)污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來(lái)源,一般是來(lái)自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤(rùn)的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細(xì)胞聚團(tuán)的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括:1.過(guò)度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過(guò)度生長(zhǎng)、5.污染等;如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成;首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長(zhǎng)密度及狀態(tài),80%左右的生長(zhǎng)密度即可進(jìn)行傳代,此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細(xì)胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細(xì)胞空泡情況有1.細(xì)胞老化2.培養(yǎng)液錯(cuò)誤配制;3.細(xì)胞消化時(shí)操作不當(dāng);4.污染等等,如細(xì)胞老化,解決方法,原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過(guò)高
細(xì)胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細(xì)胞全換液;如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補(bǔ)充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細(xì)胞半換液;"細(xì)胞半換液"又稱(chēng)"細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進(jìn)去,選它的原因其實(shí)與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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