常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IMP-M197
規(guī)格：5×105cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：懸浮培養(yǎng)
培養(yǎng)基：小鼠脾臟中性粒細胞專用培養(yǎng)基
價格：￥5200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥2580
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
中性粒細胞(neutrophil)是在瑞氏(Wright)染色血涂片中，胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細小的(0.2~0.4微米)淺紅或淺紫色的特有顆粒。細胞核呈桿狀或2~5分葉狀，葉與葉間有細絲相連。中性粒細胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細胞來源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，與細胞的吞噬和消化功能有關。中性粒細胞來源于骨髓的造血干細胞，在骨髓中分化發(fā)育后，進入血液或組織。在骨髓、血液和結締組織的分布數(shù)量比是28：1：25，成年人血液中中性粒細胞的數(shù)量約占白細胞總數(shù)的55%一70%。
| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | 原代小鼠脾臟中性粒細胞（免疫熒光鑒定報告） | |||
| 種屬來源 | 小鼠 | |||
| 組織來源 | 脾臟 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 分離方法 | 通過密度梯度離心法獲得 | |||
| 細胞鑒定 | CD11b/Integrin alpha M+、CD15+、CD45+或CD18+免疫熒光染色為陽性，細胞純度高于90% | |||
| 支原體檢測 | 小鼠脾臟中性粒細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 培養(yǎng)基 | 小鼠脾臟中性粒細胞專用培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞代數(shù) | 第1代 | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵） | |||
| 供應限制 | 僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復蘇細胞/T25瓶運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 3.靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細胞/1ml凍存管運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復蘇操作 | 1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。 | |||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 | |||
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？
答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。
問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？
答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。
細胞重發(fā)標準
1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；
5.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細胞不予重發(fā)標準
1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行傳代,此時細胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當;4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,選它的原因其實與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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