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細胞株購買:18046200267 廈門愛恪信生物細胞株引進ATCC,DSMZ,JCRB,ECACC,CCTCC,昆明細胞庫等保藏中心,正規(guī)來源,細胞準確

PA317小鼠胚胎成纖維細胞(種屬鑒定報告)

貨號:IM-M193

規(guī)格:1x106cells/T25或1mL凍存管

形態(tài):成纖維細胞樣,貼壁生長

培養(yǎng)基:DMEM+10%FBS

培養(yǎng)環(huán)境:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

傳代比例:1:2至1:3,每周 2-3次

產(chǎn)品貨期:2周左右

價格:¥1500

配套相關(guān)培養(yǎng)產(chǎn)品

背景簡介

通過用逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝構(gòu)建體DNA (pPAM3)和作為片段攜帶在pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶(TK)基因共轉(zhuǎn)染NIH 3T3 TK-細胞來產(chǎn)生細胞系PA317。除了包裝信號的缺失之外,構(gòu)建體pPAM3還含有幾個突變。這些特征似乎阻止了輔助病毒的產(chǎn)生和包裝功能的轉(zhuǎn)移。用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染或感染導(dǎo)致產(chǎn)生具有雙嗜性宿主范圍的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。它們能夠感染哺乳動物細胞,并已被用于將基因轉(zhuǎn)移到人體中。PA317細胞在長期培養(yǎng)過程中會失去包裝能力。因此,在細胞冷凍保存前,應(yīng)常規(guī)進行選擇。選擇程序包括在含HAT的培養(yǎng)基(0.03mM次黃嘌呤、0.001mM甲氨蝶呤、0.02mM胸苷)中生長5天。為了稀釋殘留的甲氨蝶呤細胞,然后應(yīng)在含HT的培養(yǎng)基(0.03mM次黃嘌呤,0.02mM胸苷)中培養(yǎng)4天。細胞在選擇后至少穩(wěn)定1個月。在冷凍保存前,由HPACC提供的細胞將在非選擇性培養(yǎng)基中生長約2周。因此,在需要重復(fù)前述選擇程序之前,細胞應(yīng)該穩(wěn)定至少2周。

細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱PA317小鼠胚胎成纖維細胞(種屬鑒定報告)
細胞別稱pA317; 小鼠胚胎成纖維細胞
種屬來源小鼠/雄性/胚胎
組織來源胚胎
生長特性貼壁生長
細胞形態(tài)成纖維細胞樣
細胞代數(shù)10代以內(nèi)
細胞規(guī)格1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測
培養(yǎng)基DMEM+10%FBS
培養(yǎng)條件氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件無血清凍存液,液氮儲存
保藏機構(gòu)ATCC; CRL-9078,CCTCC; GDC0126,ECACC; 89032007,ICLC; HTL06006,KCB; KCB 2011112YJ

PA317小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)操作步驟

PA317小鼠胚胎成纖維細胞傳代操作方法

到貨方式:復(fù)蘇細胞/T25瓶運輸

收貨處理

1.收到PA317細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有,請立即和我們聯(lián)系;如果沒有,請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁,再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。細胞密度小于80%時,請換液并讓細胞瓶處于透氣狀態(tài)(培養(yǎng)基不能回收使用)。

2.靜置后觀察細胞狀態(tài),在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞傳代操作步驟

傳代密度:PA317細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)

1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,棄去消化液,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將PA317細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

3申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息,建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同,導(dǎo)致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異,對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為,不予過度解釋或免費售后。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞復(fù)蘇操作步驟

到貨方式:凍存細胞/1ml凍存管運輸

收貨處理

1.干冰運輸?shù)募毎截洠垯z查干冰是否完全揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.為保證細胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請立即解凍復(fù)蘇細胞,如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞復(fù)蘇方法

將含有1 mLPA317細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻

在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞存操作方法

凍存液配方:無血清凍存液,液氮儲存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細胞,那就用1ml完培重懸后,取部分按平時方法計數(shù),剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。

如果沒要求,那就按平時,一個皿凍一管。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞凍存操作步驟

待PA317細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數(shù)。

2.根據(jù)細胞株數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x10^6~1x10^7/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

PA317小鼠胚胎成纖維細胞凍存注意事項

凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案

科研細胞購買常見問題

問:為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢?

答:部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件,我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件,出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件,為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng),建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問:凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別?

答:細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式,常溫細胞貨期一般一周左右,復(fù)蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨;凍存細胞有庫存的話,一般當天或者隔天可以發(fā)貨,細胞系凍存細胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管,實際發(fā)貨2管;原代凍存細胞發(fā)貨1管,凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸,所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問:培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎?

答:一般不建議重復(fù)利用,特別是貼壁不牢固細胞,重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差,漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次,其次需要注意無菌操作,避免污染。

問:運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答:不能回收使用的,運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多,所以收到細胞之后,培養(yǎng)箱靜置4-6h之后,請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問:凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致,有的紅有的粉,對復(fù)蘇會有影響嗎?

答:這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn),與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān),偶爾有遇到這種情況,不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響,可以復(fù)蘇看下。

問:不同引種單位的同一株細胞,RRID都是一樣的嗎?

答:是的,同一個細胞系只有一個RRID。

科研細胞售后服務(wù)

細胞重發(fā)標準

1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);

2.收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā);

3.收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā);

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā);

5.細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā);

6.視具體情況而定。

細胞不予重發(fā)標準

1.客戶操作造成細胞污染,不重發(fā);

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4.細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā);

5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā);

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā);

7.視具體情況而定。

PA317細胞_PA317小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)方法條件

PA317細胞_PA317小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)視頻教程

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細胞保藏機構(gòu)查詢

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