背景簡介

SMMC-7721細胞取自人肝癌組織，采用靜置和旋轉(zhuǎn)管法培養(yǎng)11天細胞開始生長，首次傳代23天。SMMC-7721細胞AFP陽性；用Northern Blot方法，未能檢測到SMMC-7721細胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表達，免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤。

一、細胞基本屬性
細胞名稱	SMMC-7721人肝癌細胞（STR鑒定報告）
細胞別稱	SMMC 7721; SMMC7721; H7721; H-7721；人肝癌細胞
種屬來源	人
年齡性別	男
組織來源	肝臟
生長特性	貼壁生長
細胞形態(tài)	上皮細胞樣
STR位點信息	Amelogenin：X;CSF1PO：10;D13S317：13.3，15.1;D16S539：9，10;D18S51：16;D19S433：13;D21S11：27，28;D2S1338：17;D3S1358：15，18;D5S818：11，12;D7S820：12;D8S1179：12;FGA：18，21;TH01：7;TPOX：12;vWA：16，18;
STR鑒定位點圖
細胞代數(shù)	10代以內(nèi)
細胞規(guī)格	1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測	無
培養(yǎng)基	DMEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
細胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞
特別說明	以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
二、細胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細胞/T25瓶運輸
收貨處理	1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細胞/1ml凍存管運輸
收貨處理	1.干冰運輸?shù)募毎截洠垯z查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。
注意事項	1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。
三、細胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

參考文獻

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Accepted: 3 March 2023Received: 18 April 2022 | Revised: 20 February 2023 | Accepted: 3 March 2023 DOI: 10.1002/cam4.5811

作者：Guoxin Hou、Zhimin Lu、Jialu Jiang、Xinmei Yang

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