常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IM-H084
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
培養(yǎng)基：90%1640+10%FBS+PS
傳代比例：1:2至1:3，每周 3次
價格：￥1500
產品規(guī)格：500ml
￥800
產品規(guī)格：100mL
￥500
產品規(guī)格：100mL
￥98
產品規(guī)格：100mL
￥68
GES-1細胞是從9個月的胎兒胃上皮細胞中培養(yǎng)分離出來，經(jīng)過SV40病毒轉染后，篩選獲得。不能在裸鼠中成瘤，是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng)。
| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | GES-1人胃黏膜上皮細胞（STR鑒定報告） | |||
| 細胞別稱 | GES1；GES-1，人胃粘膜細胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 9個月 | |||
| 組織來源 | 胃 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細胞形態(tài) | 細胞樣 | |||
| 細胞代數(shù) | 10代以內 | |||
| STR位點 | Amelogenin：X；CSF1PO：9,10；D2S1338：17；D3S1358：15,18；D5S818：11,12；D6S1043：18,19；D7S820：8,12；D8S1179：12,13；D12S391：20,25；D13S317：12,13.3；D16S539：9,10；D18S51：16；D19S433：13；D21S11：27,28；FGA：21；PentaD：8,15；PentaE：7,17；TH01：7；TPOX：8,12；vWA：16,18 | |||
| STR鑒定位點圖 |  | |||
| 細胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%1640+10%FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復蘇細胞/T25瓶運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細胞/1ml凍存管運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復蘇操作 | 1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。 | |||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 | |||
miR-133a-5p suppresses gastric cancer through TCF4 down-regulation. J Gastrointest Oncol. 2021 Jun;12(3):1007-1019. doi: 10.21037/jgo-20-418. PMID: 34295552; PMCID: PMC8261329.
作者：He MQ, Wan JF, Zeng HF, Tang YY, He MQ.
細胞：Human gastric epithelial cell line GES-1 and human gastric carcinoma cell line MGC-803, BGC-823, HGC-27, SGC-7901
2022年影響因子/JCR分區(qū)：2.587/Q4
1986年始，迄今為止，關于人胃黏膜細胞(GES-1)的文獻有1141篇。
在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“GES-1”搜索該關鍵詞，第一篇為1986年J D McGhee 在“The major gut esterase locus in the nematodeCaenorhabditis elegans”。
GES-1細胞是通過將9個月孕期的胎兒胃黏膜上皮細胞進行SV40轉染而建立的細胞系。細胞整合了SV40 T基因并在細胞核中表達，染色體變成超二倍體。GES-1細胞還保持正常的細胞骨架，PAS反應陽性，在裸鼠中不致瘤。GES-1細胞可作為研究人類胃癌發(fā)生的重要模型系統(tǒng)。GES-1細胞模型在胃部疾病的發(fā)病機制、藥物篩選、幽門螺旋桿菌感染研究、氧化應激和細胞凋亡研究以及信號通路研究中都有廣泛的應用。
通過在GES-1細胞中加入不同濃度的酒精，觀察細胞活力、細胞損傷程度以及炎癥因子的表達，從而了解酒精如何引起胃炎和胃潰瘍;將GES-1細胞與幽門螺旋桿菌共培養(yǎng)，觀察細胞的炎癥反應、細胞凋亡以及細胞周期的變化，從而研究幽門螺旋桿菌感染與胃炎、胃潰瘍的關系。
通過基因轉染或使用化學物質(如MNNG)處理GES-1細胞，誘導其惡性轉化，建立胃癌細胞模型，用于研究胃癌的發(fā)病機制和尋找新的治療靶點;通過觀察惡性轉化后的GES-1細胞在體外侵襲和轉移的能力，了解胃癌細胞的生物學行為，為胃癌的防治提供理論依據(jù)。
使用GES-1細胞模型，評估具有胃黏膜保護作用的藥物(如胃復安)對胃上皮細胞的保護作用，為臨床用藥提供依據(jù);通過在GES-1細胞模型中篩選具有抗腫瘤活性的藥物，為胃癌的化學治療提供候選藥物。
通過觀察GES-1細胞與幽門螺旋桿菌的相互作用，了解幽門螺旋桿菌如何侵入胃上皮細胞，為預防和治療幽門螺旋桿菌感染提供理論依據(jù);通過檢測GES-1細胞中炎癥因子的表達，了解幽門螺旋桿菌感染引起的炎癥反應，為研究胃炎和胃潰瘍的發(fā)病機制提供幫助。
GES-1細胞在氧化應激和細胞凋亡研究方面
通過給予GES-1細胞氧化應激刺激，觀察細胞的損傷程度和細胞凋亡情況，了解氧化應激在胃部疾病中的作用。通過給予GES-1細胞抗氧化劑(如維生素C)處理，觀察細胞的損傷程度和細胞凋亡情況，了解抗氧化劑對胃上皮細胞的保護作用。
通過給予GES-1細胞NF-κB信號通路的激活劑或抑制劑，觀察細胞的炎癥反應和細胞凋亡情況，了解NF-κB信號通路在胃部疾病中的作用。通過給予GES-1細胞MAPK信號通路的激活劑或抑制劑，觀察細胞的炎癥反應和細胞凋亡情況，了解MAPK信號通路在胃部疾病中的作用。
人胃黏膜細胞系GES-1的標志物包括Cytokeratin、Pepsinogen、EGFR、Gastrin、Integrins、CAMs、Fibrinogen、PAI-1、Laminin、Collagen IV等。這些標志物對于識別和研究GES-1胃黏膜細胞至關重要。
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？
答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。
問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？
答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。
細胞重發(fā)標準
1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細胞3天內，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；
5.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細胞不予重發(fā)標準
1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行傳代,此時細胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當;4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,選它的原因其實與前面不加···
產品規(guī)格：1*10^6
產品規(guī)格：1*10^6
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產品規(guī)格：5*10^5
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產品規(guī)格：1*10^6
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