背景簡(jiǎn)介
SUM149PT細(xì)胞系來(lái)源于人類(lèi)炎性乳腺癌(IBC),其代表了乳腺癌的侵襲性亞型。IBC的特點(diǎn)是進(jìn)展迅速,早期轉(zhuǎn)移,預(yù)后不良。SUM149PT細(xì)胞被歸類(lèi)為三陰性乳腺癌(TNBC),缺乏雌激素受體(er)、孕激素受體(PR)和HER2受體的表達(dá),使它們對(duì)內(nèi)分泌治療或HER2抑制劑等常見(jiàn)靶向治療無(wú)反應(yīng)。相反,對(duì)這些癌癥的治療通常包括細(xì)胞毒性化療,盡管這些癌癥經(jīng)常隨著時(shí)間的推移而產(chǎn)生耐藥性。 值得注意的是,SUM149PT細(xì)胞具有2288delT BRCA1突變,導(dǎo)致BRCA1功能喪失。這種突變是一種移碼缺失,導(dǎo)致BRCA1蛋白過(guò)早終止,損害DNA修復(fù)并促進(jìn)基因組不穩(wěn)定性,這是BRCA1突變癌癥的標(biāo)志。BRCA1的缺失導(dǎo)致在SUM149PT中觀察到的染色體不穩(wěn)定性增加,這表現(xiàn)出許多染色體畸變。除了突變,BRCA1基因座在SUM149PT中丟失,進(jìn)一步加重了對(duì)基因組穩(wěn)定性的影響。 令人驚訝的是,SUM149PT細(xì)胞表現(xiàn)出CD44+/CD24-/低干細(xì)胞樣癌細(xì)胞亞群,其富含癌癥干細(xì)胞(CSC)特性,如增加的侵襲、腫瘤發(fā)生和對(duì)化療的抗性。這些干細(xì)胞樣細(xì)胞也與中心體擴(kuò)增和細(xì)胞周期蛋白E/Cdk2活性升高有關(guān)。在SUM149PT中抑制Cdk2選擇性靶向這種CSC亞群,恢復(fù)對(duì)化療的一些敏感性,這表明靶向Cdk2和常規(guī)化療的聯(lián)合治療策略可能對(duì)治療耐藥IBC有效。
細(xì)胞產(chǎn)品信息
細(xì)胞名稱(chēng) | SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞(STR鑒定報(bào)告) |
細(xì)胞別稱(chēng) | SUM-149PT; SUM 149PT; SUM149-PT; SUM149; SUM-149; SUM 149; 149 PT; 149PT; BrCL12 |
種屬來(lái)源 | 人/女性/40Y |
組織來(lái)源 | 乳腺 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
STR位點(diǎn) | Amelogenin:X;CSF1PO:12;D2S1338:20;D3S1358:17;D5S818:11;D6S1043:18;D7S820:11;D8S1179:14,16;D12S391:15,18;D13S317:12;D16S539:11;D18S51:14,15;D19S433:12,14;D21S11:28,31.2;FGA:29;Penta D:8,9;Penta E:11;TH01:9.3;TPOX:9;vWA:16,18 |
細(xì)胞代數(shù) | 10代以?xún)?nèi) |
細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測(cè) | 無(wú) |
培養(yǎng)基 | SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 | 無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 |
保藏機(jī)構(gòu) | CLS; 300609 |
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞傳代操作方法
到貨方式:復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸
收貨處理
1.收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有,請(qǐng)立即和我們聯(lián)系;如果沒(méi)有,請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁,再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。細(xì)胞密度小于80%時(shí),請(qǐng)換液并讓細(xì)胞瓶處于透氣狀態(tài)(培養(yǎng)基不能回收使用)。
2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài),在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞傳代操作步驟
傳代密度:細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,棄去消化液,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1
min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
2.因運(yùn)輸問(wèn)題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。
3申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息,建議客戶(hù)在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5.
細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異,對(duì)于此類(lèi)細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為,不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟
到貨方式:凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸
收貨處理
1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨,請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2.為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞復(fù)蘇方法
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻
在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。
然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4
mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞凍存操作方法
凍存液配方:無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
凍存密度
如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞,那就用1ml完培重懸后,取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù),剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞?/p>
如果沒(méi)要求,那就按平時(shí),一個(gè)皿凍一管。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞凍存操作步驟
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例
1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1
mL血清重懸細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
2.根據(jù)細(xì)胞株數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x10^6~1x10^7/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3.將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
SUM149PT人乳腺癌細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)
凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案,
答:部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件,我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件,出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件,為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng),建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
答:細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式,常溫細(xì)胞貨期一般一周左右,復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨;凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話,一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨,細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶(hù)復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管,實(shí)際發(fā)貨2管;原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管,凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸,所以?xún)龃婕?xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
答:一般不建議重復(fù)利用,特別是貼壁不牢固細(xì)胞,重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差,漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次,其次需要注意無(wú)菌操作,避免污染。
答:不能回收使用的,運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多,所以收到細(xì)胞之后,培養(yǎng)箱靜置4-6h之后,請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
答:這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn),與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān),偶爾有遇到這種情況,不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響,可以復(fù)蘇看下。
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā);
5.細(xì)胞活性問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā);