背景簡介

BDCM是從患有急性髓性白血病的男性患者的外周血中分離的B淋巴母細胞系。該細胞系由RA斯泰因曼保藏，可用于免疫學和免疫系統(tǒng)疾病研究。

細胞產(chǎn)品信息

BDCM人急性髓系細胞白血病細胞培養(yǎng)操作步驟

BDCM人急性髓系細胞白血病細胞傳代操作方法

到貨方式：復蘇細胞/T25瓶運輸

收貨處理

1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系;如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。

2.靜置后觀察BDCM細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。

3.靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度

c.如密度90%，建議傳代

4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm，5min。

BDCM細胞傳代操作步驟

傳代密度：BDCM細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

BDCM細胞培養(yǎng)注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

3申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。

BDCM人急性髓系細胞白血病細胞復蘇操作步驟

到貨方式：凍存細胞/1ml凍存管運輸

收貨處理

1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉入液氮凍存。

BDCM細胞復蘇方法

培養(yǎng)皿/瓶：一管BDCM細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。

2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

3.然后將所有BDCM細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。

4.第二天換液并檢查細胞密度。

BDCM人急性髓系細胞白血病細胞凍存操作方法

凍存液配方：無血清凍存液，液氮儲存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。

如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。

BDCM細胞凍存操作步驟

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集BDCM細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。

2.根據(jù)BDCM細胞株數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x10^6~1x10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

BDCM人急性髓系細胞白血病細胞凍存注意事項

凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案