NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞（STR鑒定報告）

貨號：IM-H200 來源：ATCC

規(guī)格：1×10⁶cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：淋巴母細胞樣，懸浮生長

培養(yǎng)基: NK92專用完全培養(yǎng)基(已添加IL2)

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

NK92細胞剛復(fù)蘇時用T25瓶立起來培養(yǎng)，以促進細胞聚團

NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞說明書

價格：￥3000

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背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

背景簡介

NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。

一、細胞基本屬性
細胞名稱	NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞（STR鑒定報告）
細胞別稱	NK-92；人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞；NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2
種屬來源	人
年齡性別	男；50歲
組織來源	淋巴
生長特性	懸浮生長
細胞形態(tài)	淋巴母細胞樣
細胞代數(shù)	10代以內(nèi)
注意事項	NK-92細胞復(fù)蘇后需一周左右時間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時密度盡量大些
STR位點	Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:9,12；D16S539:11,12；D18S51:12,17；D21S11:31.2,32；D3S1358:15；D5S818:12,13；D7S820:10,11；D8S1179:12,15；FGA:20,22；PentaD:10,12；PentaE:12；TH01:6,9.3；TPOX:8；vWA:16,18
STR鑒定圖片
流式鑒定
生物安全等級	2
細胞規(guī)格	1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測	無
保藏機構(gòu)	ATCC; CRL-2408 ；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫
培養(yǎng)基	NK92專用完全培養(yǎng)基（已添加IL2）
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	10%DMSO+50%FBS+40%完全培養(yǎng)基，液氮儲存
倍增時間	~40-50 hours
細胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）順豐快遞
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明	以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞培養(yǎng)常見問題
1.NK92細胞復(fù)蘇困難，復(fù)蘇后不聚集成團成分散單顆細胞，細胞碎片及死細胞多？ a.NK92細胞剛復(fù)蘇時用T25瓶立起來培養(yǎng)，以促進細胞聚團；兩天補液一次，等細胞量夠了再離心傳代； b.NK92細胞對IL2敏感，建議使用高質(zhì)量IL2，含有IL2的完全培養(yǎng)液建議現(xiàn)用現(xiàn)配或4℃保存兩周內(nèi)用完； c.NK92細胞對培養(yǎng)環(huán)境敏感，正常培養(yǎng)時，少移動，每2-3天加一次完全培養(yǎng)液； 2.NK92細胞傳代密度要怎么把握? NK92細胞團長至幾十個大細胞團時，細胞量已經(jīng)比較多，可進行傳代，輕輕吹打，將打團打散成小團即可，不要過度吹打至單顆細胞，750rpm，4min，低速離心，棄去細胞碎片及死細胞； nk92是報團生長，不容易判斷密度，必要時可以采用計數(shù)的方法，判斷是否有增殖。 3.NK92細胞IL-2濃度是多少以200 U/ml的濃度添加IL-2。 4.NK-92細胞形態(tài)特點 nk92細胞偏圓或偏橢圓，透亮，成團生長。只有成團的細胞有增殖活性，單個的細胞基本沒有增殖活力。細胞團可生長成肉眼可見的大團塊。死了的細胞會皺縮，不再透亮而變得灰暗。細胞對氧氣、養(yǎng)分及細胞密度非常敏感。養(yǎng)分不夠或密度太高情況下，細胞很容易凋亡。 5.nk92細胞培養(yǎng)技巧總結(jié) nk92細胞剛復(fù)蘇或密度較低時可以把培養(yǎng)瓶立起來培養(yǎng)，以提高細胞密度，促進細胞聚團。當(dāng)細胞聚團正常生長后，建議平躺著培養(yǎng)該細胞，以增大空氣交換面積，且液體高度最好不要超過3mm，一般T25培養(yǎng)瓶加6-8mL培養(yǎng)基，T75培養(yǎng)瓶加15mL左右培養(yǎng)基即可。培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配，配好的培養(yǎng)基最好兩周內(nèi)用完，因為葉酸和IL-2不穩(wěn)定易分解。一般情況下細胞2-3天換液一次，即使培養(yǎng)基沒有變黃。換液時輕輕側(cè)過培養(yǎng)瓶/皿，不要使細胞飄起來，用巴氏吸管輕輕吸取部分上清棄去，補加等體積的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。或者將全部培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm,離心5min，吸去上清后用新鮮培養(yǎng)輕輕重懸后重新種瓶，重懸時不可吹打過度。細胞對離心和吹打比較敏感，離心和反復(fù)吹打會影響細胞狀態(tài)，建議只在細胞產(chǎn)生大量碎片時才離心清洗。平常換液建議半換，傳代可直接補加足夠新鮮的培養(yǎng)基后直接分瓶。 NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞團長至肉眼可見，且T25瓶子有幾十上百個小團時，細胞數(shù)量已經(jīng)比較多，此時應(yīng)該2天換液一次。當(dāng)一個20倍視野有4-5個大細胞團時應(yīng)該進行傳代。傳代時加入兩倍體積的新鮮培養(yǎng)基后，輕輕吹打細胞團，將大的細胞團打散成小團，但不要劇烈吹打成單細胞懸液，因為單個的細胞是基本沒有增殖活力的細胞，然后將混勻的細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中?；蛘邔⒓毎麘乙恨D(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min后，棄去上清，加入三倍體積的新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸后轉(zhuǎn)移至三個新的培養(yǎng)瓶中。 NK-92復(fù)蘇后細胞需要重新聚團及較長的潛伏期，故復(fù)蘇時間較長，期間應(yīng)多加觀察，并注意更換培養(yǎng)基，頻率為3天一換(半換)。
二、細胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細胞/T25瓶運輸
收貨處理	1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置6h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 3.靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 4.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。
傳代密度	細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)
傳代方法	方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
到貨方式	凍存細胞/1ml凍存管運輸
收貨處理	1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。
注意事項	1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當(dāng)天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。
三、細胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

科研細胞購買常見問題

問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？

答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。

問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。

科研細胞售后服務(wù)

細胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；

3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；

5.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；

6.視具體情況而定。

細胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；

7.視具體情況而定。

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NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞（STR鑒定報告）

配套相關(guān)培養(yǎng)產(chǎn)品

NK-92細胞專用培養(yǎng)基

無血清細胞凍存液

青霉素-鏈霉素-兩性霉素B溶液（三抗）100×

0.25%胰蛋白酶溶液（溶于PBS）（胰酶）

背景簡介

NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞培養(yǎng)常見問題

1.NK92細胞復(fù)蘇困難，復(fù)蘇后不聚集成團成分散單顆細胞，細胞碎片及死細胞多？

2.NK92細胞傳代密度要怎么把握?

3.NK92細胞IL-2濃度是多少

4.NK-92細胞形態(tài)特點

5.nk92細胞培養(yǎng)技巧總結(jié)

科研細胞購買常見問題

科研細胞售后服務(wù)

NK-92(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞)(STR鑒定)培養(yǎng)方法條件

常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法

細胞聚團的原因分析及如何避免

細胞有空泡原因分析及解決方法

細胞半換液和全換液操作步驟

NK-92(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞)(STR鑒定)培養(yǎng)視頻教程

第一節(jié):復(fù)蘇細胞收貨處理教程

第二節(jié):凍存細胞收貨處理教程

第三節(jié):細胞復(fù)蘇教程

第四節(jié):貼壁細胞傳代步驟

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