背景簡介

皮脂腺是附屬皮膚的一個重要器官，其分布廣泛，主要功能是合成和分泌皮脂，滋潤皮膚、毛發(fā)，抑制和殺滅皮膚表面的細(xì)菌。同時，皮脂和汗液儀器構(gòu)成脂質(zhì)膜，其與皮膚屏障的完整性有密切關(guān)系。

細(xì)胞產(chǎn)品信息

原代人皮脂腺細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

原代人皮脂腺細(xì)胞傳代操作方法

到貨方式：復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸

收貨處理

1.收到原代人皮脂腺細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系;如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。細(xì)胞密度小于80%時，請換液并讓細(xì)胞瓶處于透氣狀態(tài)(培養(yǎng)基不能回收使用)。

2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷原代人皮脂腺細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。

原代人皮脂腺細(xì)胞傳代操作步驟

傳代密度：原代人皮脂腺細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察原代人皮脂腺細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

原代人皮脂腺細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)原代人皮脂腺細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運(yùn)輸問題，部分原代人皮脂腺細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

3申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。

原代人皮脂腺細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟

到貨方式：凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸

收貨處理

1.干冰運(yùn)輸?shù)脑似ぶ偌?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。

原代人皮脂腺細(xì)胞復(fù)蘇方法

將含有1 mL原代人皮脂腺細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻

在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

原代人皮脂腺細(xì)胞凍存操作方法

凍存液配方：無血清凍存液，液氮儲存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細(xì)胞按計數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。

如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。

原代人皮脂腺細(xì)胞凍存操作步驟

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集原代人皮脂腺細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

2.根據(jù)細(xì)胞株數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10^6~1x10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代人皮脂腺細(xì)胞凍存注意事項

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案,