小鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞背景簡(jiǎn)介

血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的異常增殖是許多心血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，在高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化和血管成形術(shù)后再狹窄等許多血管性疾病中，都涉及到血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖。血管由3個(gè)部分組成，自內(nèi)向外依次是內(nèi)膜層、中膜層和外膜層，內(nèi)膜層主要由血管內(nèi)皮層細(xì)胞和少量平滑肌細(xì)胞組成，外膜層由成纖維細(xì)胞組成，中膜層由血管平滑肌細(xì)胞組成，平滑肌細(xì)胞主要收縮調(diào)節(jié)機(jī)體的血流和血壓，其功能障礙在心血管疾病中起著非常重要的作用。因此，對(duì)血管平滑肌的生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究，才能探明上述血管疾病的發(fā)病機(jī)制。在VSMC的研究中，組織塊貼壁法和膠原酶消化法是目前采用的非常廣泛的技術(shù)。

小鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離培養(yǎng)視頻教程

小鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離培養(yǎng)主要試劑

解剖鏡，平滑肌專用培養(yǎng)基，平滑肌組織專用消化酶，尖頭鑷，PBS緩沖液，雙抗，離心管

小鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離培養(yǎng)操作過(guò)程

1.取腹主動(dòng)脈：將大鼠/小鼠麻醉后將其頸椎脫臼處死，固定、消毒、暴露胸，腹、主動(dòng)脈，沿脊柱剪取腹、主動(dòng)脈到主動(dòng)脈弓的一段血管， 剪開(kāi)腹部胸部皮膚，剪去大鼠左側(cè)的肋骨可見(jiàn)大鼠的肺，如圖所示，把肺翻起，即可見(jiàn)到主動(dòng)脈，放入預(yù)冷的培養(yǎng)基

2.分離血管中膜：先用一把顯微鑷子和一把直鑷，直鑷固定血管，顯微鑷夾去血管外的血凝塊和脂肪組織。

2.1用顯微剪把血管剪開(kāi)，用兩把眼科彎鑷，輕輕的刮一下血管內(nèi)膜，把內(nèi)皮細(xì)胞除去。

2.2刮取血管中膜。血管中膜要使用壓和推，把中膜弄下來(lái)，千萬(wàn)不要用鑷子去撕，撕起來(lái)既容易牽拉中膜，組織不完整。用彎鑷子壓住血管，另一彎鑷子也壓住血管，然后往下推，中膜由于受力就會(huì)出現(xiàn)破口，并與外膜分離開(kāi)來(lái)。膜與外膜的形態(tài)區(qū)別很容易辨認(rèn)，中膜刮下來(lái)之后還是挺拔的保持著血管的形態(tài)，而外膜就是軟軟的一灘。

3.消化：剪碎組織，加入消化酶，置于37℃ 5%培養(yǎng)箱12-18h, 組織消化至不可見(jiàn)，停止消化，

4.過(guò)篩：用70uM細(xì)胞篩過(guò)濾，離心，去上清，使用平滑肌專用培養(yǎng)基重懸。

5.純化(去除成纖維細(xì)胞)：置入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h后，取上清離心，重懸重鋪新同樣大小培養(yǎng)皿，3天換液至長(zhǎng)滿。

小鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鑒定

1. 形態(tài)學(xué)觀察

細(xì)胞主要為長(zhǎng)梭狀、帶狀或三角狀，部分細(xì)胞有突起胞核位于細(xì)胞中央，完全貼壁，胞質(zhì)完全伸展，第 4~7 d 細(xì)胞增殖速度加快，生長(zhǎng) 7 d 后細(xì)胞匯合度可達(dá) 80 %以上，細(xì)胞致密呈多層典型 " 峰 - 谷 " 結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。

2. 標(biāo)志物檢測(cè)

經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度達(dá)90%以上。