CNE1人鼻咽癌細(xì)胞背景簡(jiǎn)介

CNE細(xì)胞株來(lái)源于一位58歲女性鼻咽癌患者，EXPASY細(xì)胞庫(kù)顯示細(xì)胞存在交叉污染，STR結(jié)果顯示它與CNE-2相同，似乎是HeLa和未知來(lái)源細(xì)胞系的雜交種，PubMed=24991015的RNASeq數(shù)據(jù)也證實(shí)了這一點(diǎn)，最初被認(rèn)為來(lái)自一名58歲的鼻咽癌女性患者。

CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系是一種實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，主要用于科學(xué)研究。它源自人鼻咽癌細(xì)胞，經(jīng)分離、傳代、凍存等步驟制成。這種細(xì)胞系具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，如鼻咽癌研究、抗癌藥物篩選等。

鼻咽癌是一種常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤，發(fā)病率較高，且易于轉(zhuǎn)移。因此，對(duì)鼻咽癌的研究具有重要的臨床意義。CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系就是在這種背景下建立起來(lái)的。

CNE1人鼻咽癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱(chēng)：CNE1人鼻咽癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱(chēng)：CNE；CNE1；人鼻咽癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：鼻

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Amelogenin：X;CSF1PO：10,11;D2S1338：17,23;D3S1358：15,18;D5S818：11,12;D7S820：10,12;D8S1179：12,16;D13S317：10,12,13.3;D16S539：9,10;D18S51：13,16;D19S433：13;D21S11：27,30;FGA:18,21;TH01:6,7,9;TPOX：8,12;vWA：14,16

保藏機(jī)構(gòu)：CCTCC; Ubigene

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說(shuō)明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1.無(wú)菌環(huán)境：無(wú)菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：RPMI-1640培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

無(wú)菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴75%酒精

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前打開(kāi)水浴鍋設(shè)置37C，提前開(kāi)啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺(tái)開(kāi)燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺(tái)面

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞復(fù)蘇方法

1.從液氮罐中迅速取出凍存管，立即放入37°C水浴箱中；

2.輕輕搖晃，使CNE-1細(xì)胞快速融化解凍，最好在1min內(nèi)完成；

3.將凍存管移入離心機(jī)中1000rpm離心3min；

4.取4mL完全培養(yǎng)基到一個(gè)新的6cm培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)，日期和所用培養(yǎng)基名稱(chēng)；

5.離心結(jié)束后，以75%酒精噴凍存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)；

6.從凍存管中吸走上清，用1ml完全培養(yǎng)基重懸后，移入6cm皿中；

7.“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻；

8.把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察CNE-1細(xì)胞株貼壁情況。

注意事項(xiàng)

1.操作凍存細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用手套、工作服和防護(hù)面具等，以避免事故的發(fā)生;

2.復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，應(yīng)保持管蓋擰緊，將管蓋以下部分浸入37℃水浴中解凍，解凍過(guò)程要快;

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞傳代操作

從培養(yǎng)箱拿出CNE-1細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到80%以上時(shí)，即可進(jìn)行傳代；

1.將CNE-1細(xì)胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺(tái)中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS；

2.輕洗CNE-1細(xì)胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS棄去；

3.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落；

4.加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞吹散，移入15ml離心機(jī)管中，1000rpm，離心5min；

5.取兩個(gè)新的6cm培養(yǎng)皿，各加入6-8ml完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)，日期和所用培養(yǎng)基名稱(chēng)；

6.離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺(tái)中，吸去上清；

7.取2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，平均分配到2個(gè)皿中，“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻；

8.把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察CNE-1細(xì)胞系貼壁情況；

注意事項(xiàng)

1.培養(yǎng)過(guò)程中需維持細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，80%左右即可傳代，傳代比例請(qǐng)參照說(shuō)明書(shū)建議;

2.消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化，每次時(shí)間不超過(guò)5min。

3.培養(yǎng)過(guò)程中需要定期換液，一般細(xì)胞建議2-3天換液一次。

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

從培養(yǎng)箱拿出CNE-1細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá)80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25瓶為例

CNE-1細(xì)胞凍存步驟

1.將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺(tái)，吸去上清，沿皿壁加入5ml PBS，輕洗細(xì)胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS吸去;

2.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落，可輕拍使未脫落細(xì)胞脫落;

3.加入3ml 完全培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞吹散，移入15ml離心管中，1000rpm，離心4min;

4.取一定量的凍存管，打印標(biāo)簽，寫(xiě)明細(xì)胞名稱(chēng)，凍存日期，所用培養(yǎng)基，貼標(biāo)簽;

5.離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺(tái)中，吸去上清，取1ml無(wú)血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，后移入貼好標(biāo)簽的凍存管中，用封口膜密封管口;

6.直接將細(xì)胞放入-80度冰箱中，24h后可移入液氮中保存;

注意事項(xiàng)

1.不同細(xì)胞消化時(shí)間有差異，以實(shí)際鏡檢結(jié)果為準(zhǔn)，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)；

2.應(yīng)選擇匯合度80%-90%左右，細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行凍存操作，確保細(xì)胞凍存時(shí)狀態(tài)最佳，凍存密度可根據(jù)細(xì)胞特性進(jìn)行調(diào)整；

3.我們使用的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，可直接凍存細(xì)胞于-80度，無(wú)需程序降溫。

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞系特點(diǎn)

形態(tài)特征

CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系的細(xì)胞形態(tài)為多角形或長(zhǎng)方形，核大而明顯，胞質(zhì)豐富。

生長(zhǎng)特性

CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系生長(zhǎng)迅速，傳代周期短，適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室研究。

生物學(xué)特性

CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系具有較高的增殖活性和侵襲性，適合用于研究鼻咽癌的生物學(xué)特性、藥物敏感性、基因表達(dá)等方面的內(nèi)容。

CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞應(yīng)用

CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系可以用于亞砷酸體外抗人鼻咽癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究。

通過(guò)體外亞砷酸對(duì)CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系的增殖抑制，凋亡誘導(dǎo)及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探索亞砷酸發(fā)揮抗鼻咽癌細(xì)胞作用及誘導(dǎo)凋亡的可能機(jī)制。

方法

體外抗增殖研究

1. MTT法體外CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)于含不同濃度的亞砷酸、順鉑、5一氟脈嚓嚨，空白培養(yǎng)基作為對(duì)照;應(yīng)用研T法檢測(cè)24h、48h、72h和96h細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。

2. 倒置顯微鏡觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

3. HE染色觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞形態(tài)。

4. 流式細(xì)胞儀(FCM)分析CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞周期改變。

5. 細(xì)胞增殖標(biāo)志檢測(cè)免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)反映腫瘤細(xì)胞增殖活性的增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)及人端粒酶催化亞基(hTRT)蛋白表達(dá)。

誘導(dǎo)凋亡研究

1.形態(tài)學(xué)采用HE染色、Hoechst 33342/PI雙染色在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞、透射電子顯微鏡觀察亞砷酸作用下CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系凋亡形態(tài)改變。

2流式細(xì)胞儀(F以)檢測(cè)凋亡的“亞二倍體”峰。

3. TIJNEL法原位觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系凋亡細(xì)胞。

4. 免疫組織化學(xué)染色法(工HC)檢測(cè)亞砷酸誘導(dǎo)CNEI細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bel一2、p53的表達(dá)。

結(jié)果

抗增殖作用

1. MTT法體外實(shí)驗(yàn)顯示亞砷酸能顯著抑制CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系的增殖且有時(shí)間及濃度依賴(lài)性，隨著劑量增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)亞砷酸抑制CNEI細(xì)胞增殖能力增強(qiáng);相同質(zhì)量濃度的亞砷酸體外抑瘤能力優(yōu)于順鉑及5一氟脈嚓嚨。亞砷酸的Ic5。值在24h、48h、72h和96h分別為3.12 pg/mL、0.65 pg/InL、0.12p g/毗和0.08 pg/mL。

2.倒置顯徽鏡觀察亞砷酸作用組CNE-1人鼻咽癌貼壁細(xì)胞系體積縮小、折光性變?nèi)酰?003年5月林英城:亞砷酸體外抗人鼻咽癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究(碩士畢業(yè)論文丫貼壁細(xì)胞減少，脫落細(xì)胞增多。且隨著亞砷酸濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)更為明顯。對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)、鑲嵌狀排列鋪滿(mǎn)瓶壁。

3.HE染色未加藥對(duì)照組，細(xì)胞呈圓形、橢圓形，核漿比例大，可見(jiàn)核分裂相;亞砷酸作用組可見(jiàn)凋亡細(xì)胞。

4.FCM隨著亞砷酸濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其GZ/M比例逐漸增高。

5.PCNA及hTRT免疫組織化學(xué)染色可見(jiàn)PCNA及hTRT陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值隨著亞砷酸濃度的增加而逐漸減少。

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