U251MG人星形膠質(zhì)瘤細胞簡介

U-251 MG(U251MG)人星形膠質(zhì)瘤細胞是來源于人星形膠質(zhì)瘤組織，經(jīng)永生化處理的穩(wěn)定細胞系，主要用于人星形膠質(zhì)瘤細胞的細胞學科研研究。星形膠質(zhì)細胞瘤(astrocytome)是最常見的膠質(zhì)瘤，約占膠質(zhì)細胞瘤的65%。研究表明，該腫瘤中原癌基因C-sis有過度表達，erb-B1則有擴增。C-sis的過度表達導致PDGF-β鏈的增加;erb-B1擴增則可使EGF受體過度表達。此外，腫瘤抑制基因P53、Rb、P16可有失活，提示這些改變可能與腫瘤性的生長有關(guān)。

星形細胞瘤是一種始于腦或脊髓的細胞生長物。生長物被稱為腫瘤，始于星形膠質(zhì)細胞。星形膠質(zhì)細胞支持和連接腦和脊髓中的神經(jīng)細胞。星形細胞瘤的癥狀取決于腫瘤的位置。腦部星形細胞瘤可引起人格改變、癲癇發(fā)作、頭痛和惡心。

u251細胞形態(tài)

U251MG人星形膠質(zhì)瘤細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：U251MG，人類星形膠質(zhì)瘤細胞

細胞別稱：U-251 MG; U-251-MG; U-251_MG; U251-MG; U251MG; U-251; U251; U251n; U251N; 251 MG; 251MG; 251 MG(6);人類星形膠質(zhì)瘤細胞

種屬來源：人

組織來源：腦

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

STR位點信息：Amelogenin：X;CSF1PO：12,13;D2S1338：22,24;D3S1358：16,17;D5S818：11;D7S820：10,12;D8S1179: 13,15;D13S317：10,11;D16S539：12;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：29;FGA：21,25;PentaD：10,12;PentaE：7;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：16,18

培養(yǎng)基：89%DMEM+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

U251MG細胞培養(yǎng)操作說明

U251細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

U251MG細胞復蘇步驟方法

1.準備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘（或者放在超凈工作臺常溫放 30min）。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭（已滅菌），培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到 37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLU251細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，（若離心后細胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中），標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵（吸力不要太大）取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻U251MG（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。（盡量平直放入不要晃動），第二天換液并檢查細胞密度。

U251MG細胞傳代操作步驟

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出U251MG，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當細胞狀態(tài)良好，且密度達到 85%左右的時候即可進行傳代；

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭（吸力不要太大）取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS（6cm 皿）到細胞培養(yǎng)皿中（若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS），輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次；

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化 1-3min（根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘）后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對U251MG有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有U251MG懸液的離心管放入離心機中（配平），1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

8) 確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（盡量平直放入不要晃動）。第二天再觀察細胞密度。

U251MG細胞凍存準備

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出U251MG細胞，在顯微鏡下觀察U251MG細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達 80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25 瓶為例

U251MG細胞凍存步驟

a.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液， 在細胞凍存管上貼上細胞標簽（細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基）。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

U251MG細胞總結(jié)

1. 膠質(zhì)瘤細胞系，常用作實驗模型，是基因編輯領(lǐng)域的熱門細胞 ;

2. U251呈多角形，貼壁生長，推薦使用DMEM培養(yǎng)基;

3. 是具有代表性的癌癥細胞，被廣泛用于藥物篩選和分子靶標鑒定;

如何提高U251細胞的轉(zhuǎn)染效率

建議你轉(zhuǎn)染時用無血清培養(yǎng)液，我是轉(zhuǎn)染前半小時把細胞換無血清培養(yǎng)液孵育，然后lipo和質(zhì)粒同體積分別和無血清培養(yǎng)液混勻10min后，再混勻30min，加入細胞。5h后換回正常培養(yǎng)液。

細胞密度要控制好，狀態(tài)要好，可以在傳代后1-2天，這樣密度狀態(tài)都比較好。

U251細胞和U87細胞的區(qū)別

U251細胞和U87細胞是兩種常見的人類膠質(zhì)瘤細胞系，它們在形態(tài)學、生物學和分子特征方面存在一些區(qū)別。本文將通過對兩種細胞的細胞形態(tài)、細胞生長、細胞周期、分子特征等方面的比較，來深入了解它們之間的差異。

細胞形態(tài)

細胞形態(tài)是細胞生物學中最基本的特征之一。U251和U87細胞都是神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞系，它們的細胞形態(tài)均呈現(xiàn)出星形，長有多個突起，但兩者在細節(jié)上有一些差異。

U251細胞：U251細胞呈現(xiàn)出明顯的星狀形態(tài)，其胞體較大，細胞核較大，細胞長約為20-30μm。細胞質(zhì)濃縮，呈現(xiàn)出淡紫色，細胞核圓形或卵圓形，核周有一圈較寬的細胞質(zhì)。突起相對較短，數(shù)量較少，且常常呈現(xiàn)出多分枝的狀態(tài)。

U87細胞：U87細胞也是星形細胞，細胞質(zhì)量較少，細胞長約為15-20μm。細胞核相對較小，呈現(xiàn)出橢圓形。突起比U251細胞多，長短不一，常呈現(xiàn)出較長的狀態(tài)。

通過上述對兩種細胞的形態(tài)特征比較，可以發(fā)現(xiàn)它們在細胞體積、核體積、突起數(shù)量和長度等方面存在差異，這些差異可能與細胞生長和分子特征有關(guān)。

細胞生長

細胞生長是細胞生物學中的重要指標，也是研究細胞生物學的基礎(chǔ)。U251和U87細胞的生長特點如下：

U251細胞：U251細胞具有較快的增殖速度，平均倍增時間為30小時左右。此外，U251細胞的增殖受到外界因素的影響較大，如細胞培養(yǎng)條件、細胞密度等。在適宜的培養(yǎng)條件下，U251細胞可以形成較為緊密的單層細胞群。

U87細胞：U87細胞的生長速度較慢，平均倍增時間為50小時左右。此外，U87細胞的生長不受細胞密度的限制，即使在高密度培養(yǎng)條件下，它們?nèi)匀豢梢哉ＩL和分裂。

通過上述對兩種細胞的生長特點比較，可以發(fā)現(xiàn)它們的生長速度和生長受到的影響因素有所不同，這些差異可能與細胞周期和分子特征有關(guān)。

細胞周期

細胞周期是細胞生長和分裂的基礎(chǔ)過程，它由G1、S、G2和M四個階段組成。U251和U87細胞的細胞周期如下：

U251細胞：U251細胞的細胞周期長約為24小時，其中G1期長約為11小時，S期長約為7小時，G2期長約為5小時，M期長約為1小時。此外，U251細胞的G1期較長，表明它們在細胞分裂前需要較長的時間進行細胞生長和準備工作。

U87細胞：U87細胞的細胞周期長約為30小時，其中G1期長約為15小時，S期長約為7小時，G2期長約為6小時，M期長約為2小時。此外，U87細胞的G1期較長，表明它們在細胞分裂前需要更長的時間進行細胞生長和準備工作。

通過上述對兩種細胞的細胞周期比較，可以發(fā)現(xiàn)它們的細胞周期長度和各個階段的持續(xù)時間存在差異，這些差異可能與分子特征有關(guān)。

分子特征

細胞的分子特征是細胞生物學研究中的熱點和難點，它反映了細胞的生理狀態(tài)和功能特點。U251和U87細胞的分子特征如下：

1. 基因型

U251細胞和U87細胞都具有TP53和EGFR基因的過度表達，這些基因在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。此外，U251細胞中還存在一些特異性基因表達，如NF1、CDKN2A、PTEN等，這些基因的異常表達也與膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。

2. 細胞周期調(diào)控

U251細胞和U87細胞的細胞周期都受到多種細胞周期調(diào)控因子的調(diào)控，如CDK、p21、p27等。其中，U251細胞的CDK2、CDC2和CDK4的表達較高，而U87細胞則以CDK4為主。

3. 細胞凋亡和增殖

U251細胞和U87細胞的凋亡和增殖也存在一些差異。U251細胞的凋亡率較高，增殖速度也相對較快，而U87細胞則相反，凋亡率較低，增殖速度較慢。

通過上述對兩種細胞的分子特征比較，可以發(fā)現(xiàn)它們在基因型、細胞周期調(diào)控、細胞凋亡和增殖等方面存在差異，這些差異可能是導致細胞形態(tài)、生長和分裂特點不同的原因之一。

總結(jié)

U251細胞和U87細胞是兩種常見的人類膠質(zhì)瘤細胞系，它們在形態(tài)學、生物學和分子特征方面存在一些差異。通過對兩種細胞的細胞形態(tài)、細胞生長、細胞周期、分子特征等方面的比較，可以發(fā)現(xiàn)它們在細胞形態(tài)、生長速度、細胞周期長度、各個階段的持續(xù)時間、基因型、細胞周期調(diào)控、細胞凋亡和增殖等方面存在一定的差異，這些差異可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。

u251細胞文獻溯源

1982年始，迄今為止，關(guān)于人類星形膠質(zhì)瘤細胞的文獻已有435篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“U251MG cell line”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1982年Yoshida J在J Colloid Interface Sci.發(fā)表的“Tumor microenvironment sensitization via dual-catalysis of carbon-based nanoenzyme for enhanced photodynamic therapy”。

文獻概述

研究人員對一種新的水溶性亞硝酰脲藥物ACNU進行了抗腫瘤活性測試，對象是四種腦膠質(zhì)瘤細胞系。

測試了四個因素以確定ACNU的抗腫瘤活性：細胞生長抑制、形態(tài)學觀察、DNA直方圖分析和微孔板敏感性測試。

ACNU對兩種細胞系(EA285和U251-MG)表現(xiàn)出細胞生長抑制作用，但對另外兩種細胞系(YE2-2和T98)耐藥。

目前的敏感性測試結(jié)果與其它檢查一致，表明這種測試在選擇藥物和確定有效劑量方面是有幫助的。

u215細胞應(yīng)用領(lǐng)域

U251，人膠質(zhì)瘤細胞系，該細胞系是利用外植體技術(shù)，從惡性膠質(zhì)母細胞瘤中分離得到。U251在膠質(zhì)母細胞瘤的研究中常用作實驗模型，可用于提取腫瘤干細胞以及膠質(zhì)細胞瘤發(fā)展機制、藥物抗膠質(zhì)細胞瘤生長的研究等，適合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因編輯領(lǐng)域的熱門細胞系。

星形細胞瘤是最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤，源自星形膠質(zhì)細胞，也可能源于神經(jīng)膠質(zhì)祖細胞或神經(jīng)干細胞。這些腫瘤可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的任何部位發(fā)生，成年人和兒童的發(fā)生部位有所不同。根據(jù)惡性程度，星形細胞瘤分為低度(I和II級)和高度(III和IV級)兩類。低度腫瘤通常進展緩慢，預后較好;而高度腫瘤惡性程度高，預后較差。

在研究中，學者常用人類星形膠質(zhì)瘤細胞(U251MG)研究該細胞細胞凋亡機制(信號通路研究)與抗腫瘤藥物如紫杉醇的敏感性和療效。

研究人員還利用U251MG細胞研究人膠質(zhì)母細胞瘤細胞的凋亡與相關(guān)抗腫瘤藥物、新型治療策略、放射敏感性與放射治療、免疫反應(yīng)與炎癥、藥物敏感性與耐藥性等治療特性。細胞標志物：1. 波形蛋白(Vimentin)2. 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)3. 微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)4. 神經(jīng)微絲蛋白(NF-200)5. 神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)