RAW 264.7細胞培養(yǎng)過程中密度過大，培養(yǎng)基顏色發(fā)黃都易刺激細胞分化，分化的RA264.7細胞呈多角形，體積明顯增大，時常有較長的黑色觸角，那么RAW 264.7細胞如何避免分化及分化該處理呢?

RAW 264.7小鼠巨噬細胞背景簡介

RAW 264.7細胞是從Abelson小鼠白血病病毒(MuLV)誘導的腫瘤中建立的雄性小鼠巨噬細胞細胞系，Raschke等人于1976年首次報道了該細胞系。RAW 264.7細胞sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW 264.7細胞不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。根據(jù)Janet W.Hartley博士在2008年發(fā)表的一項研究，RAW 264.7細胞被證明表達生態(tài)性和多向性MuLV，并且使用XC噬斑試驗對病毒復制呈陽性。RAW 264.7細胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導RAW 264.7細胞分解紅血球，但對腫瘤靶細胞無作用。RAW 264.7細胞易于繁殖，DNA轉(zhuǎn)染效率高，對RNA干擾敏感，并支持小鼠諾如病毒的復制，可以用于3D細胞培養(yǎng)、免疫系統(tǒng)紊亂和免疫學研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

RAW 264.7小鼠巨噬細胞分化如何處理

一、RAW 264.7細胞如何避免細胞分化

RAW 264.7細胞消化時不能用胰酶消化，消化會造成細胞分化，客戶可以用移液槍吹打，會比巴氏吸管方便一點。

二、RAW 264.7細胞分化處理

前面我們說到RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實驗室用細胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在這邊我們推薦“吹打傳代”方法，其操作步驟簡單，也能更好地控制細胞分化率。

(一)吹打傳代操作步驟

1.輕拍幾下培養(yǎng)皿

2.用1ml 的槍或者巴氏管把細胞吹下來

3.細胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

4.1200rpm(約250g) 離心3min

5.去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞

6.按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

(二)吹打傳代時機

1.當細胞密度較低的時候，可能不太好吹下來。

2.當細胞密度達到80%~90%的時候，最容易吹下。

(三)操作注意事項

1.RAW 264.7細胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；

2.分化的細胞貼壁牢固，傳代的時候請勿強制性吹下這些細胞，只接種容易吹下的那些未分化細胞；

3.吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；

4.細胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打；

5.存在少量分化細胞，培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細胞形態(tài)主要為圓形。因其對環(huán)境非常敏感，在培養(yǎng)時會出現(xiàn)少量短梭形或多角形的分化細胞，這是正?，F(xiàn)象。分化的細胞貼壁牢固，而未分化的細胞貼壁松散。根據(jù)貼壁松緊差異，可將未分化的細胞吹下，并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

6. 對胰酶敏感。RAW264.7細胞對胰蛋白酶敏感，接觸胰酶后將很快發(fā)生自發(fā)分化，貼壁變緊，很難消化下來。所以不建議用胰酶對該細胞進行傳代。

7. 生長較快RAW264.7細胞生長速度較快，建議每天觀察細胞密度，當細胞密度到達80%時及時進行傳代，以防細胞過度生長狀態(tài)變差。