hek293t是什么細胞

人胚腎細胞293細胞插入SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。該細胞最初的名字是293tsA1609neo，293T細胞還表達E1A蛋白，SV40 large T抗原，含有SV40復(fù)制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。293T細胞容易轉(zhuǎn)染，用磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，效率均可達90%以上。除用于基因表達及蛋白生產(chǎn)外，還用于慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒的包裝。

HEK293細胞中轉(zhuǎn)入SV40大T抗原基因形成的衍生株，即為HEK293T 細胞系。這使得包含SV40復(fù)制起始點的質(zhì)粒能夠在該細胞系中顯著擴增，從而促進表達載體的擴增和蛋白質(zhì)表達。HEK293T細胞能同時表達SV40大T抗原。有些含 SV40病毒的復(fù)制起始點(如pcDNA31)真核表達載體，能夠在表達SV40病毒T抗原的細胞系中復(fù)制，作為基因治療的病毒基因載體，常用于腺病毒生產(chǎn)。293T細胞容易轉(zhuǎn)染，用磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，效率均可達90%以上。

HEK293T細胞除了可用于各類基因表達及蛋白質(zhì)生產(chǎn)，還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒包裝，如腺病毒、慢病毒等。

hek293t是什么細胞圖片

293T人胚腎細胞特點

1.細胞貼壁較弱

細胞貼壁比較弱，因此在遇到運輸?shù)蜏丶罢鹗帯⑹覝仂o置太長時間、添加的培養(yǎng)基或其他試劑過冷、密度較高、聚集未吹散、加液吹打到細胞面等情況時會出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象，此時若脫落現(xiàn)象不嚴重應(yīng)盡快放回培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若呈大片脫落的情況時需要收集細胞重新消化吹散并接種;

建議使用經(jīng)過包被或者高貼壁培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞，盡量避免接觸低溫或密度過高;

2.細胞本身偏嗜酸性，消耗培養(yǎng)基較快

細胞在略微偏酸性的環(huán)境下生長狀態(tài)會比偏堿性的好，注意培養(yǎng)基pH控制;

細胞密度達到70%以上時，培養(yǎng)基消耗會很快，主意及時觀察并換液;

3.細胞生長聚集成島狀

細胞呈島狀聚集生長，逐步向外側(cè)擴散直至完全融合;

4.細胞聚團后很難再吹散

細胞傳代過程中一定要注意吹散細胞，接種密度不要過高，否則接種后細胞聚團將很難再吹散，會形成類似球狀的聚集體貼壁生長，培養(yǎng)條件合適的情況下細胞會逐漸攤開生長，但若培養(yǎng)條件無法有效促進細胞貼壁，可能會長時間呈球狀增殖。

HEK293 與 HEK293T 比較

HEK293T 細胞是HEK293細胞最廣泛使用的衍生物之一，是通過將溫度敏感的 SV40 T 抗原突變體整合到原始 HEK293 細胞基因組中而創(chuàng)建的。當轉(zhuǎn)染到 293-T 細胞中時，T 抗原的表達允許具有 SV40 復(fù)制起點的質(zhì)粒進行復(fù)制，從而導(dǎo)致重組蛋白產(chǎn)量增加。

293T人胚腎細胞特點

a.細胞貼壁能力比較弱：293T細胞是貼壁細胞，但其貼壁能力比較弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。比如：運輸?shù)蜏丶罢鹗?、在室溫條件下靜置時間過長、添加的培養(yǎng)基或其他試劑溫度過低、培養(yǎng)時細胞密度過高、細胞聚集時未吹散、加液吹打時觸碰了細胞表面等。

若脫落現(xiàn)象不嚴重應(yīng)將細胞盡快放回培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若出現(xiàn)大片脫落的現(xiàn)象需要收集細胞重新消化吹散再接種。

b.細胞本身偏嗜酸性，培養(yǎng)基消耗較快;293T細胞在略偏酸性的環(huán)境下生長狀態(tài)更好，在培養(yǎng)過程中需要時刻注意培養(yǎng)基的pH值。在細胞密度達到70%以上時，細胞培養(yǎng)基的消耗速度較快，需要時刻觀察并及時換液。

c.細胞生長時聚集成島：293T細胞生長時呈島狀聚集生長，會逐步向外擴散直到完全融合。

d.細胞聚集成團之后很難再吹散：293T細胞傳代過程中一定要注意吹散細胞，同時接種的密度不可過高。密度過高容易使細胞抱團，導(dǎo)致難以再次吹散，會在培養(yǎng)器皿中形成類似于球狀的聚集體貼壁生長。導(dǎo)致即使培養(yǎng)條件合適細胞也難以生長。

293T細胞優(yōu)勢

1.具有一致的結(jié)果和細胞具有高度可重復(fù)性。

2.可以高效地大量生產(chǎn)重組蛋白，使其成為新藥開發(fā)的主流貢獻者。

3.可用于穩(wěn)定和瞬時基因表達。

4.HEK 293 細胞對轉(zhuǎn)染有明顯的反應(yīng)，并且可以在轉(zhuǎn)染中使用不同的化學和物理方法。

293T細胞的主要特性

轉(zhuǎn)染效率高

293T細胞表達SV40大T抗原，并含有SV40復(fù)制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)粒，這些特征使得它們能夠在體外高效地轉(zhuǎn)染外源基因。這種細胞因此成為了研究基因功能的強大工具。HEK293T細胞與HEK293細胞一樣，容易通過磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體等方法進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率可達90%以上。

適用于大規(guī)模表達

HEK293T細胞可懸浮培養(yǎng)用于大規(guī)模表達，表達蛋白的結(jié)構(gòu)最接近其在人體內(nèi)的構(gòu)象。

快速生長和高密度培養(yǎng)

HEK293T細胞在培養(yǎng)體系中能夠快速增長，支持高密度培養(yǎng)。

對外界微環(huán)境敏感

與神經(jīng)元細胞一樣，HEK293T細胞對外界微環(huán)境較為敏感，利用這一特點，可用于藥物發(fā)現(xiàn)及細胞毒性測試。

293T細胞的應(yīng)用

HEK293T細胞主要用于基因表達及蛋白生產(chǎn)，此外，它們還常用于慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒的包裝。這些細胞通過轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，使得包含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細胞系中顯著擴增，從而促進表達載體的擴增和蛋白的表達。HEK293T細胞除了可用于各類基因表達及蛋白生產(chǎn)外，還具有以下特點和應(yīng)用：

此外，HEK293T細胞系還廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)蛋白、疫苗、抗癌試劑及重組腺病毒包被等，是生物制藥和生物醫(yī)學研究中的重要工具。

基因轉(zhuǎn)移和表達研究

由于293T細胞具有高轉(zhuǎn)染效率的特點，它們常被用于基因轉(zhuǎn)移和表達研究?？茖W家可以通過轉(zhuǎn)染技術(shù)將感興趣的基因轉(zhuǎn)入293T細胞中，然后通過各種分析方法來研究這些基因的功能和相互作用。

慢病毒包裝

293T細胞也是慢病毒包裝的理想工具。慢病毒是一種病毒載體系統(tǒng)，可以感染細胞并實現(xiàn)穩(wěn)定導(dǎo)入基因或siRNA的目的。293T細胞因其高轉(zhuǎn)染效率而被廣泛用于慢病毒的生產(chǎn)和包裝。

總結(jié)

綜上所述，293T細胞作為一種高度轉(zhuǎn)化的腎上皮細胞系，因其高轉(zhuǎn)染效率、快速生長和易于操作等特點，在基因轉(zhuǎn)移和表達研究、特別是慢病毒包裝方面發(fā)揮著重要作用。