產(chǎn)品簡介

Dispase II，中文名分散酶II，一種非特異性金屬蛋白酶，細胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離單細胞，并用于后續(xù)細胞培養(yǎng)，如原代細胞的分離，細胞傳代等。另外，Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細胞聚集。與其他細胞生物學(xué)常用蛋白酶(如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等)相比，該酶具有以下優(yōu)勢：1)一種快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性;2)來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染;3)穩(wěn)定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響;4)可用于多種類型組織和細胞的分離等。

本品非無菌Dispase II，來源于Bacillus polymyxa，使用時需對其除菌處理，用于細胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

產(chǎn)品信息

酶活力單位定義

在37℃，pH7.5 的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當(dāng)于1 μM(181 μg)酪氨酸的福林陽性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個蛋白酶活性單位，以U表示。

Dispase II 分散酶II使用說明

1.Dispase II儲存液的配制

(1)用Hepe緩沖鹽溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解適量本品凍干粉，配制成10 mg/mL的儲存液，用0.22 μM濾膜過濾除菌。

(2)使用時用適當(dāng)細胞培養(yǎng)液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

注：不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。

2.組織的解離

(1)用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊;

(2)用無菌PBS清洗組織塊;

(3)向上述組織塊中加入Dispase II溶液(工作濃度為0.6-2.4 U/mL)，并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。

(4)37℃孵育，孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。注：若第一次使用該酶，可通過細胞計數(shù)來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織，1h即可達到分離目的，但更長時間(如數(shù)小時)的孵育也不會明顯影響細胞活性。

(5)如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾，以分開單細胞與殘留的組織塊?；蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。

(6)離心沉淀細胞，倒掉酶溶液;

(7)用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細胞。

3. 細胞傳代

(1)利用Dispase 溶液(37℃預(yù)熱)浸沒細胞，于37℃孵育5 min;

(2)吸除上述溶液，繼續(xù)于37℃孵育10 min;

(3)顯微鏡下觀察細胞分離情況，如需要，可進一步孵育15 min;

(4)利用細胞培養(yǎng)基懸浮細胞，輕輕旋轉(zhuǎn)使得細胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細胞;

(5)換用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞，并按常規(guī)方法進行細胞鋪板。

Dispase II 分散酶II注意事項

1.儲存液于4℃可穩(wěn)定保存2周，若長期保存，請分裝后于-20℃凍存，2個月有效。避免反復(fù)凍融。

2.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。