產(chǎn)品簡(jiǎn)介

潮霉素B是一種由吸水鏈霉菌代謝產(chǎn)生的氨基糖苷類抗生素。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)的合成，殺死原核(細(xì)菌)、真核(例如酵母菌，真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。

大腸桿菌來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理，潮霉素B是一種非常有用的抗性選擇標(biāo)記，可用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418、Zeocin或Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細(xì)胞株的選擇。此外，潮霉素B還能用作抗病毒劑，或混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。

本產(chǎn)品為無(wú)菌的潮霉素B溶液(50 mg/mL)，可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。常用工作濃度為200-500 μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系，建議通過建立劑量反應(yīng)曲線來確定最佳篩選濃度。

產(chǎn)品信息

Hygromycin B（潮霉素B）使用說明

1. 潮霉素B劑量反應(yīng)曲線的確定

對(duì)于初次使用的細(xì)胞，一般需要通過實(shí)驗(yàn)來確定適合自身實(shí)驗(yàn)體系的劑量反應(yīng)曲線(dose-response curve or kill curve)。

(1) 第一天：24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接種未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，接種足夠量的孔以便進(jìn)行后續(xù)的劑量梯度實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

(2) 第二天： 在培養(yǎng)過夜后的細(xì)胞中更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基，該篩選培養(yǎng)基為含不同濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基(如 0、50、100、250、500、750、1000 μg/mL 等)，更換培養(yǎng)基后在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。接下來每3-4天更換新的含抗生素培養(yǎng)基。

(3) 按照固定的周期進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的合適濃度，選擇在7-10天能殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

2. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

轉(zhuǎn)染含有抗性基因的質(zhì)?；蛘吒腥竞性摶虻牟《竞?，即可篩選穩(wěn)定表達(dá)株。

(1) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染48 h后，將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用最明顯。細(xì)胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降，所以細(xì)胞的密度最好不超過 25%。建議同時(shí)做一個(gè)正常細(xì)胞的對(duì)照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后，如果細(xì)胞過密也可以消化后重新接種細(xì)胞，培養(yǎng)過夜后即可進(jìn)行潮霉素B篩選。

(2) 每隔3-4天，更換含有抗生素的新鮮培養(yǎng)基。

(3) 篩選7天后，對(duì)照組正常細(xì)胞應(yīng)該100%死亡，轉(zhuǎn)染組中存活的細(xì)胞為表達(dá)潮霉素B抗性基因的細(xì)胞。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行多克隆或單克隆細(xì)胞的篩選。

(4) 挑選出的穩(wěn)定抗性克隆繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7-10天，之后更換正常培養(yǎng)基即可。

注意事項(xiàng)

1. 使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染;

2. 本產(chǎn)品為濃縮液，請(qǐng)根據(jù)需要稀釋后使用;

3. 本產(chǎn)品可能對(duì)人體有一定的毒害作用，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)，以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。