支原體污染檢測技術(shù)服務(wù)

技術(shù)簡介

支原體，直徑在0.1-0.3微米，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡單的原核生物，可以輕松地通過濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性形態(tài)。支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見的污染細(xì)胞的原核生物，能夠抑制細(xì)胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細(xì)胞抗原性，導(dǎo)致染色體改變等。因此每一株外來細(xì)胞都應(yīng)進(jìn)行支原體檢測，并且應(yīng)對培養(yǎng)中的細(xì)胞進(jìn)行定期支原體檢測。本實(shí)驗(yàn)室采用PCR檢測法鑒定支原體污染現(xiàn)象，并用專門的試劑進(jìn)行清除。

為什么要做支原體污染清除與檢測

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室建立新的細(xì)胞系，細(xì)胞功能不正常，文章發(fā)表，國外期刊雜志要求，細(xì)胞凍存之前或?qū)嶒?yàn)室細(xì)胞常規(guī)定期檢測時(shí)，需要進(jìn)行支原體污染檢測。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測。以細(xì)胞為載體的科學(xué)研究，如果不能保證所用的細(xì)胞無支原體污染，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果很可能是極端不可靠甚至是完全錯(cuò)誤的。

支原體具有變形能力，可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm)，因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問題，世界各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。支原體可通過細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會(huì)消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。